訂購信息：
| 目錄號 | 產品名稱 | 規格 |
| X10004 | Hygromycin B 潮霉素B（凍干粉） | 1g |
| X10005 | Hygromycin B (50 mg/ml) 潮霉素B（50 mg/ml） | 20ml |
產品描述：
潮霉素B（Hygromycin B）是由吸水鏈霉菌（Streptomyces hygroscopicus）代謝產生的一種氨基糖苷類抗生素，通過干擾70S核糖體易位和誘導對mRNA模板的錯讀而抑制蛋白合成，從而殺死原核（如細菌）、真核（如酵母菌，真菌）和高等哺乳動物真核細胞。
大腸桿菌（ Escherichia coli.）來源的潮霉素抗性基因（hyg或hph），編碼潮霉素B磷酸轉移酶，將潮霉素B轉化成不具有生物活性的磷酸化產物，從而起到解毒作用。針對這一原理，潮霉素B是一種非常有用的選擇性標記，用來篩選和維持培養成功轉染潮霉素抗性基因的原核或者真核細胞。另外，由于作用模式的差異，常與G418 (GeneticinTM)，Zeocin? 和Blasticidin S聯合使用進行雙抗性陽性細胞株的選擇。潮霉素B還能用作抗病毒劑，因其選擇性滲透進入因病毒感染增強通透性的細胞，且具有抑制翻譯的功效。還可混合入動物飼料中起到驅蟲功能。
特性說明：
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分子式 |
C20H37N3O13 |
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CAS號 |
31282-04-9 |
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純度 |
＞90% by HPLC |
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活力 |
≥1050 U/mg |
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分子量 |
527.52 g/mol |
使用說明：
1 、常用篩選濃度
潮霉素B用來篩選穩轉株的工作濃度需要根據細胞類型，培養基，生長條件和細胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000 μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應性曲線，來確定最佳篩選濃度。
一般而言，哺乳動物細胞50-500 μg/mL；細菌/植物細胞20-200 μg/mL；真菌300-1000μg/mL。
2 、殺滅曲線的建立
1）第一天：未轉化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養板上，37℃，CO2培養過夜。【注】：對于需要更高密度來檢測活力的細胞，可增加接種量。
2）根據細胞類型，設定合適范圍內的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例，可設定50，100，250，500，750，1000 μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/mL，然后按照下表稀釋到相應濃度的工作液。
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終濃度（μg/mL） |
培養基體積（mL） |
5 mg/mL潮霉素B加入體積（mL） |
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50 |
9.9 |
0.1 |
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100 |
9.8 |
0.2 |
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250 |
9.5 |
0.5 |
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500 |
9 |
1 |
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750 |
8.5 |
1.5 |
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1000 |
8 |
2 |
3）第二天：替換舊的培養基，換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養基。每個濃度做三個平行孔。
4）接下來每3-4天更換新的含藥物培養基。
5）按照固定的周期（如每2天）進行活細胞計數來確定阻止未轉染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數（通常是7-10天）內能夠殺死絕大多數細胞的最低濃度為穩定轉染細胞篩選用的工作濃度。
3. 穩定轉染細胞的篩選
1）轉染48 h后，用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養基來傳代細胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。【注】：細胞處于活躍分裂狀態時抗生素的殺傷效果最好。則當細胞過于稠密，其效率會降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細胞稀釋至豐度不超過25%。
2）每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養液。
3）篩選7天后觀察并評估細胞克隆（集落）的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間，這取決于宿主細胞類型，轉染，以及篩選效果。
4）挑取并轉移5-10個抗性克隆于35 mm細胞培養板，繼續用含藥物的篩選培養液維持培養7天。
5）之后更換正常培養基培養即可。
注意事項：
1）運輸：冰袋運輸
2）保存：4℃或-20℃保存，避免反復凍融。有效期2年。
3）潮霉素B的抗性基因（hyg或hph）除了來自E. Coli.外，還發現于其他的菌株，包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。
4）本品為有毒化合物，避免與皮膚和眼睛接觸，請小心操作。
本產品僅供科研使用，不可用于臨床診斷應用或其他用途。
