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產(chǎn)品描述：

XYIzol Reagent是一種即用型且操作迅捷的總RNA抽提試劑，適用樣本廣泛，包括人、動物、植物、酵母或細(xì)菌來源的細(xì)胞和組織樣本。本品是一種含酚、異硫青酸胍和其他專利成分的單相溶液，有利于抽提分子量大小不一的各種RNA類型。能夠良好的維持RNA完整性，因能高效抑制樣本勻漿過程中細(xì)胞破損和細(xì)胞組分溶解時釋放的RNase活性。XYIzol Reagent能夠同時處理大量樣本，且以優(yōu)化的方式一步法提取RNA，整個過程可在一小時內(nèi)完成。

分離的總RNA無蛋白質(zhì)和DNA污染，適用于RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、poly(A）+篩選、體外翻譯、RNase保護(hù)分析和分子克隆等下游實驗。

使用說明：

1、需自行準(zhǔn)備的材料

水浴鍋

異丙醇

75%乙醇

含0.5%SDS的RNase-free水或DEPC處理水（可選：RNase-free的糖原）

2、樣品的制備

當(dāng)樣品富含蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或是細(xì)胞外物質(zhì)例如肌肉，脂肪組織和植物的塊莖部分時可能需要一額外的分離步驟。勻漿化后在2—8°C的條件下以12,000×g的離心力離心10分鐘，移除勻漿中不溶解的物質(zhì)，余下的沉淀中包含有細(xì)胞外膜，多糖，以及高分子量DNA，而上層的超浮游物含有RNA。在來自于脂肪組織的樣品中，大量的脂肪漂在最上層因而應(yīng)該除掉。在每一個個案中，將清亮的勻漿溶液轉(zhuǎn)移到一干凈的試管中加入氯仿并繼續(xù)進(jìn)行下述的分離步驟。

3、分離階段

將勻漿樣品在15—30°C條件下孵育5分鐘以使核蛋白體完全分解。每1 ml XYIZOL加0.2 ml氯仿。蓋緊樣品管蓋，用手用力搖晃試管15秒并將其在30°C下孵育2—3分鐘。在2—8°C下以不超過12,000×g的離心力高速冷凍離心15分鐘。離心后混合物分成三層：下層紅色的苯酚-氯仿層，中間層，上層無色的水樣層。RNA無一例外地存在于水樣層當(dāng)中。水樣層的容量大約為所加XYIZOL容量的60%。

4、 RNA的沉淀

將水樣層轉(zhuǎn)移到一干凈的試管中，如果希望分離DNA和蛋白，有機層同樣要予以保留。通過將水樣層和異丙醇混合來沉淀RNA。最初均化時的每1 ml XYIZOL對應(yīng)0.5 ml異丙醇。將混合的樣品在15—30°C條件下孵育10分鐘并在2—8°C下以不超過12,000×g的離心力高速冷凍離心10分鐘。RNA沉淀在離心前通常不可見，形成一膠狀片狀沉淀附著于試管壁和管底。

5、RNA的洗脫

移去上層懸液。用75%的乙醇洗滌RNA沉淀一次，每1 ml的 XYIZOL至少加1 ml的75%乙醇。旋渦振蕩混合樣品并在2—8°C下以不超過7,500×g的離心力高速冷凍離心5分鐘。

6、RNA的再溶解

在操作的最后，簡單干燥RNA沉淀（空氣干燥或真空干燥5—10分鐘）不要在真空管里離心干燥RNA。尤為重要的是，不能讓RNA沉淀完全干燥那樣會極大地降低它的可溶性。部分溶解的RNA樣品其A260/280比值< 1.6。用移液管尖分幾次移取無RNA酶的水或0.5% SDS溶液來溶解RNA，并在55—60°C下孵育10分鐘（當(dāng)RNA以后要用于酶切反應(yīng)時，避免使用SDS。）RNA還能被100%甲酰胺（除去離子）再溶解并保存在–70°C。

注意事項：

1）所有離心管、槍頭以及相關(guān)溶液都必須無RNase污染。對于塑料制品、玻璃和金屬器皿、實驗儀器等可使用懋康生物的固相RNase清除劑去除RNase，或者用含0.01%DEPC的去離子水浸泡過夜，之后高壓滅菌、烘干。對于實驗溶液可使用懋康生物的液相RNase清除劑來處理或用DEPC處理水來配制。

2）對新鮮組織或細(xì)胞樣本的抽提效果通常優(yōu)于凍存的組織或細(xì)胞，由于組織或細(xì)胞凍融過程中可能存在一些RNase釋放出來并酶切樣品。若是不能及時抽提RNA，推薦先加入適量XYIzol Reagent，之后裂解樣品后再凍存。

3）XYIzol Reagent含有毒物質(zhì)，請在操作過程中注意好防護(hù)工作，戴好手套和護(hù)眼罩，避免皮膚接觸。在通風(fēng)櫥內(nèi)完成操作，避免呼吸道吸入。

4）保存：2-8℃保存，有效期一年

5）運輸：冰袋運輸

本產(chǎn)品僅供科研使用，不可用于臨床診斷應(yīng)用或其他用途。